艾滋病病毒灭活检测

艾滋病病毒灭活检测介绍

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HIV病毒灭活检测方法之悬液定量灭活试验操作程序

1)）从液氮中取出冻存的MT4 细胞，在 37℃温水中迅速融化，并用细胞维持液洗涤两次后，转种于加有10ml 完全培养基培养瓶中。逐日观察细胞生长情况，在细胞对数生长期时收获细胞用于消毒试验。2）从液氮中取出冻存HIV-1毒种，接种于含10ml细胞悬液（含细胞700 000个/ml~800 000个/ml）培养瓶中。逐日观察病变，待3/4细胞出现病变时，收获病毒。收获时，将培养液取出，尽快离心，并将含病毒的上清液按每管0.5ml分装于无菌离心管（1.5ml）中，冷冻保存于-80℃备用。如不能立即离心,可暂将培养瓶冷冻保存于-20℃，并争取尽快离心分装。

3）取待测消毒剂，用无菌去离子水作1:2、1:4、1:8...系列稀释。视消毒剂的类型和实验目的，确定最高稀释度。为防止污染培养液，必要时在试验前需将消毒剂过滤除菌。

4）取50u l待检消毒剂，与50u l病毒原液混合。在规定温度作用一定时间（根据试验要求确定作用时间和温度），立即加入0.9ml用完全培养基制备的MT4 细胞悬液（400 000个/m1)，在37℃，放置40min，以确保残留病毒全部吸附在细胞上。阳性（病毒）对照组试验中,用无菌去离子水代替消毒剂;消毒剂对细胞毒性组试验中，用无菌去离子水代替病毒。

5）取出反应管，立即采取去除残留消毒剂处理。处理可用物理去除法或中和剂法(所用方法需先经试验证明,既可有效去除残留消毒剂，又对细胞和 HIV无杀灭或抑制作用。

6)在96孔培养板上滴定样本中残留的病毒量。先在培养板(96孔)的各孔中，加入100u l用完全培养基制备的MT4 细胞悬液（含细胞400 000个/ml)。同时，用完全培养基对待滴定样本做1:10 系列稀释，然后取100u 1稀释好的样本加入已含MT4 细胞悬液的96孔培养板内。每个稀释度做4孔。

7将按上述程序加液的96孔培养板,放入二氧化碳培养箱中(37℃，5% CO2)，逐日在显微镜下观察细胞病变。被感染细胞融合肿胀，出现多核巨细胞。第4 d，在各反应孔内补加50u l新鲜完全培养基。第7d，逐孔观察并记录细胞病变情况。

8）试验重复3 次。

评价规定

1）对测试滴度的HIV，3次灭活试验后均应不再检出，此时的灭活对数值应≥4.00，可判为该消毒剂浓度与作用时间，对HIV污染物消毒的实验室试验合格。

2）在正常情况下，HIV阳性对照组病毒感染滴度（TCID.o）对数值应在5~7之间。阴性对照组宿主细胞生长良好，并且无HIV 检出。所用浓度的消毒液对宿主细胞生长无不良影响。否则,根据发现的问题，或调整HIV悬液浓度，或选择适宜消毒液浓度，或更换污染试剂和培养基，或改进其他有关条件后，重做试验。

注意事项

1)操作人员应具有较丰富的病毒学实验工作经验,必须绝对遵守BSL3实验室的安全制度。身体状态欠佳，或有伤口时，应暂时停止工作。2）有感染可能性的操作，均应在 BSL3实验室的层流负压超净工作台中进行。

3）一旦发生事故，有病毒感染或污染环境的可能时，切莫惊慌，除立即进行妥善消毒处理外，并应尽快报告实验室和单位领导。

4）本试验周期较长，在全部过程中应注意防止样本污染。

飞凡检测质检报告流程：

1、 提供产品资料

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3、 确认报价没有问题，然后把样品送到我们实验室

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