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2D双向凝胶电泳与质谱分析

作者:小编 更新时间:2022-05-07 点击数:

  双向凝胶电泳是将不同种类的蛋白质按照等电点和分子量差异进行高分辨率分离的分析方法。成功的二维电泳可以将2000到3000种蛋白质进行分离,是目前的同时能分离和展示的方法,在蛋白质组学中发挥重要的作用。


        通过对蛋白质双向电泳的图谱扫描,用相关软件(PDQUEST等)进行图谱差异分析,找到差别点。然后把差别点切出,进行脱色、酶解。最后样品进入质谱测试,得到质谱原始数据文件。通过搜库可得到差别点蛋白质的详细信息。先将蛋白质根据其等电点在pH梯度胶内进行等电聚焦,然后按照它们的相对分子量大小进行SDS聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)第二次电泳分离。电泳后对凝胶进行染色,并用相关软件对图像进行分析处理。


 



1、待检测蛋白要求:完整无明显降解的总蛋白,蛋白量最低5mg,浓度最低为4ug/ul,蛋白提取试剂要求:使用普通的组织、细胞裂解液即可,切忌不要使用二维电泳试剂提取;

2、直接提供组织或细胞,细胞样品,细胞量>108;组织样品,植物鲜嫩组织、动物、微生物组织湿重>300mg;体液样品,血液体积>1ml;后续操作全部由天科生物来做,您只需要提供样本,其他试剂都无需提供。

3、蛋白运输:24小时内可以4度运输;

4、蛋白长期保存:-20℃

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