基因/miRNA表达水平分析验证
定量PCR（即时聚合酶链锁反应，Real-time Polymerase Chain Reaction，简称 Real-time PCR、即时PCR），又称定量即时聚合酶链锁反应（Quantitative real time polymerase chain reaction，简称即时定量PCR）。定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量。该技术可以准确的检测基因的相对表达量和绝对表达量，被广泛地应用与基因表达水平的研究。同时，它也作为一些组学技术的验证，比如转录组测序、表达芯片等实验结果验证。
1. 技术重复质量评估分析；
2. Ct值计算
△Ct（Treated）= CT（Treated_gene A）-CT（Treated_housekeeping gene）
△Ct（Control）= CT（Control_gene A）-CT（Control_ housekeeping gene）
△△Ct=△Ct（Treated）-△Ct（Control）
3. 对于有生物学重复的检测，计算SD和p-value。
与RT-PCR相比，荧光定量PCR具有以下技术优势：
1、实时监测：通过扩增曲线能够实时监测PCR产物的积累。
2、特异性强：实验完成后，溶解曲线的分析可以验证扩增产物的特异性，降低假阳性。
3、精确定量：利用扩增进入指数增长期的CT值来定量测定起始模板量，从而实现了极为精确的核酸定量检测。
（一）样品类型
1. 总RNA；样品浓度：≥250 ng/ul；样品总量：>5ug；样品纯度： OD260/280为1.8~2.2，OD260/230≥1.0，260nm处有正常峰值。RNA完整性： 电泳检测28S/18S≥1.5。
2. 组织：样品取样后立即液氮速冻，保存于液氮或超低温冰箱中。请尽量使用新制备的样品且样品量至少满足3次以上提取；
（二）样本运输
1. 总RNA样品请溶于RNase-free H2O或乙醇中，置于1.5 ml RNase-free离心管中，管上注明样品名称、浓度以及制备时间，管口使用Parafilm封口，干冰运输；
2. 样本取样后置于冻存管中并标注，使用足量的干冰运输，并且尽量选用较快的邮递方式，以降低运输过程中样品降解的可能性。
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